去百度文库，查看完整内容>
内容来自机振教矿才序静居盾唱础用户:Zora_zy
CRISPR/Cas9基因敲除还西钢屋属材殖原理及其应用CRISP然跳晶硫了光放R(clustered,regularly歌interspaced,shortpalindromicrepeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，含志民结烧耐钟钟这为其能够广泛应用提供过段了便利条件[1]。目前，来自Streptococcuspyogenes的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9时副汽静蛋白（含有两个核酸酶结构域，可别衣械茶兵英划几京校以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结属短建待情身战话流独与合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DN获市降待交怀A双链进行切割，使DNA双链断敌志复裂。由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统[1]。
通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造晚费燃飞地学山听草保我，将其连接在一起得到sgRNA（singleguideRNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方那著围众转便研究者使用。通过将表达s顶压分政乡检宁杨没gRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者[2,3]的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作。
目前常用的CAS9研究方法是通过普通质粒,质粒构建流程如呼材肉静距艺督密日下：
Cas9质粒构建
设
标签：敲除,CRISPR,as9
